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你知道PCR,qPCR,dPCR分别是什么吗?它们有什么区别?

  PCR,qPCR,dPCR分别是什么吗?这些东西,在生物行业里见的比较多,我们生物行业的从业人员懂得应该多一些。PCR技术,在二十世纪八十年代被发明。现在DNA扩增已成为生物学研究的基础。96孔板厂家告诉大家,在过去的三十年中,这项经典技术已得到不断改进,以解决研究中的新问题和新需求。从经典PCR,实时定量PCR到当前的数字PCR,PCR技术在不断变化,但从未消失。如今,PCR技术已经从实验室中分离出来,在遗传鉴定和疾病诊断中发挥了巨大作用,并且在日益广阔的领域中具有新的生命力。

 
qPCR mix
  PCR方法
 
  PCR的原理在这里不需要进一步解释。多年来,研究人员基于此开发了一系列衍生技术。当前的PCR方法可分为三类:终点PCR,qPCR和dPCR。
 
  终点PCR
 
  端点PCR是原始,简单的PCR方法,并且今天仍然被广泛使用。 PCR反应完成后,用户只能通过凝胶电泳,毛细管电泳等方法检测产物。终点PCR本身无法量化,因为反应产生的DNA数量可能无法反映初始情况。例如,不同样品和序列之间的扩增效率存在差异。
 
  qPCR和dPCR
 
  研究人员已经通过两种方式克服了定量PCR分析的挑战:实时定量PCR(qPCR)和数字PCR(dPCR)。 qPCR主要使用插入染料或荧光探针(例如TaqMan)。通过监测PCR期间的荧光强度,可以比较多个样品的DNA水平。数字PCR(dPCR)的基本工作原理很简单。先将样品分为多个PCR反应,每个反应多包含一个模板。然后通过对阳性和阴性反应进行计数来确定初始样品中模板分子的数量。
 
  SYBR?Green是一种DNA插入染料,广泛用于qPCR。随着PCR循环的继续,染料的荧光强度将继续增加,从而使人们能够定量反应中的DNA。 SYBR Green方法比探针方法便宜且易于使用。但是,该方法也具有固有的缺点。 SYBR Green方法可产生更多非特异性产物,这可能导致高背景和假阳性。但是,这种久经考验的技术仍然非常流行,许多研究人员都是SYBR Green方法的忠实拥护者,并愿意接受该技术的次要缺陷。
 
  尽管qPCR和dPCR都能够定量样品中的核酸,但它们有一个重要的区别。 qPCR只能实现相对定量(例如,样品A的目标序列是样品B的目标序列的两倍),除非使用此标准生成标准曲线。数字PCR本身是绝对定量的,不需要标准曲线。另一方面,qPCR技术更加成熟和众所周知,市场上有大量商业产品可供选择。 dPCR仍然是小的新鲜肉。它不如qPCR广泛使用且价格昂贵。与dPCR相比,qPCR更适合于高通量分析,并且动态范围广。
 
  DPCR通常更准确。 qPCR可以轻松区分两倍的浓度差异(例如5个拷贝和10个拷贝),但是面对小的差异,它却较弱。 dPCR理论上可以识别相差少于20%的拷贝数,例如5和6拷贝。该准确度对于量化涉及染色体重排的基因的拷贝数或量化癌症患者血液中的循环生物学指标特别有用。由于dPCR相当于在反应结束时稀释样品并读取数据,因此dPCR比qPCR对抑制剂的抵抗力更高。
 

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