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96孔板厂家浅谈如何判断细胞培养中细胞污染的类型!

  我们知道,生物实验对于操作环境与操作要求是十分严格的,如果操作不当或细胞培养期间条件控制不合适,则很容易受到化学或生物因素的污染。下面,96孔板厂家浅谈如何判断细胞培养中细胞污染的类型!
 

96孔板示例

  常见的污染源是:

  1、细菌污染

  细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染。即使将抗生素添加到细胞培养液中,也可能由于不小心处理而导致污染。常见的是革兰氏阳性细菌,如干草棒。

  革兰氏阴性菌如大肠杆菌和假单胞菌,其中金黄色葡萄球菌更常见。 96孔板当培养的细胞被细菌污染时,培养液变混浊并且pH变化。污染后,细胞发生病理变化,细胞内颗粒增多,变厚,然后变圆,死亡。

  2、真菌污染

  真菌污染是常见的细胞培养形式。常见的真菌是烟曲霉,黑曲霉,孔子,毛霉,白色念珠菌和酵母。

  培养的细胞被真菌污染后,观察到漂浮在培养液中的白色或淡黄色点,一些被分散,培养液一般不浑浊;在倒置显微镜下,丝状,管状或树枝状

  菌丝在细胞之间或培养基中纵横交错,有些排列成链状。

  真菌污染后,细胞生长缓慢,但后来细胞因营养物质耗尽和毒性而脱落。

  3、支原体污染

  支原体是可以在细菌和病毒之间独立生存的Z小微生物。Z小直径为0.2μm。通常,它不能通过过滤和灭菌除去。在光学显微镜下很难看到它的形态结构。起初不容易找到,

  96孔板厂家告诉大家,它可以在碱性条件下存活并且对青霉素具有抗性。更多地吸附在细胞表面或散布在细胞之间。

  培养的细胞被支原体污染后,一些敏感的细胞可以看到细胞生长缓慢增殖,一些细胞变圆,从瓶壁上掉下来。但是,大多数细胞在污染后没有明显变化,或者如果不及时则略有变化加工也会产生交叉污染。

  4、病毒污染

  在组织细胞培养过程中,如果不去除潜在的病毒,将发生病毒污染。目前,在原代猴肾细胞培养物中发现了不少于20种血清病毒。尽管受病毒污染的细胞不会影响原代培养,但生产疫苗并不安全。因此,潜在的病毒是细胞的大量生产和疫苗和干扰素等生物制品的生产中的问题。

  5、不同细胞污染

  由于每种细胞株所需的设备和溶液在细胞培养操作过程中没有严格分离,因此一个细胞通常被另一个细胞污染。目前,世界上已有数十个细胞被HeLa细胞污染,导致许多实验无效。在培养细胞异常生长的情况下,有必要鉴定细胞的污染以便于补救措施。确定污染的常用方法如下:

  1、检测细菌和真菌污染

  (1)目视观察

  细菌和真菌污染通常在开放操作(例如通过,液体交换和样品加载)之后发生,并且增殖迅速。如果存在污染,可以在48小时内清楚地观察到,例如,培养液变浑浊或轻微振荡,浮动的物体有很多浮动。

  (2)在显微镜下观察

  在倒置显微镜的高倍放大下,可以看到漂浮在培养液中的大量球形颗粒,这是细菌污染。

  如果细胞之间存在丝状,管状,树枝状或卵圆形物质,它们通常会被真菌污染。

  (3)接种观察

  还可以发现用普通肉汤接种或用不含抗生素的培养基接种会被污染。

  2、检测支原体污染

  (1)相差显微镜观察

  在载玻片上直接取少量培养液滴,然后盖上盖板观察,支原体是显微镜下的暗微观颗粒,大多位于细胞和细胞之间,有时表现出类似布朗运动的表现。应注意将其与细胞破坏的内容区分开来,例如线粒体。

  (2)通过荧光染色观察

  使用荧光染料Hoechst33258,染料可以特异性地与DNA结合,并且支原体中的DNA可以着色。在荧光显微镜下,支原体是散布在细胞周围或附着在细胞表面的绿点。

  (3)电子显微镜

  96孔板厂家认为,如果条件允许,可以通过扫描电子显微镜或透射电子显微镜观察。通常,在细胞培养48至72小时,在细胞接近汇合之前,用胰蛋白酶消化细胞以制备细胞悬浮液,将其固定,包埋和切片,可以观察到。

  (4)文化测试

  将5 mL细胞悬浮液加入45 mL Mycoplasma肉汤培养基中,培养14天后观察肉汤培养物中是否存在雾状沉淀,然后取0.5 ml已冷却至50°的培养基C,然后用琼脂培养基分开。将培养物在37℃培养3天,观察“抽蛋”菌落的存在与否。

  3、病毒检测

  1)通过电子显微镜快速诊断动物病毒病

  2)逆转录 - 聚合酶链反应RT-PCR检测病毒

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