新闻中心

如何利用96孔板把细胞铺匀,告诉你步骤!

  为了做实验,细胞铺匀是常见的一种。然而,有许多人不是很成功,分布也不均匀:要么中间密集,周围稀疏,要么周围密集,中间秃顶。以下是利用96孔板把细胞铺匀,希望对大家有用!
 

96孔板案例

  方法/步骤

  1、通常,在96孔板的每个孔中加入100微升细胞悬浮液。 从底部附近的井的左侧添加细胞悬浮液。 加入一半平板后,混合细胞悬液,不要再加入,继续加入剩余的一半平板。 添加完所有板后,盖上板,用左手轻轻握住板的左侧,用右手轻轻轻敲板的右边缘,注意抓力(我通常轻敲三次)。 如果它太强或太多次,细胞就会被浓缩和堆积。 顺时针旋转盘子(逆时针效果不好),依次敲击剩余的三面,静置约5分钟,放入37度培养箱中。

  对于6孔板、12孔板或24孔板,我在第一个孔中加入少量无血清培养基,摇动并渗透到整个孔的底部,然后用移液管枪将整个孔的底部吸到第二个孔中。用同样的方法渗透到井底,同时模拟其它井,这样整个井底都是湿的,细胞悬浮液将平放在整个井底。 加入细胞悬液时,可以避免中间加入更多细胞,中间加入更少细胞的现象,细胞分散更均匀。 注意,加入细胞悬液后,细胞悬液应放在工作台上静置。这个方法有点慢,但是当你熟练的时候它并不慢。也可以涂抹,但强度不如96孔板,效果不如96孔板,所以我放弃了渗透井底的方法。

  2、加入细胞悬液后,抬起细胞培养板,从底部向上观察光线,看细胞是否聚集。然后从底部敲击以分散它。

  3、如果实验室有平板振荡器,建议用这个仪器轻微振荡。 效果好,即振幅小、频率高。

  4、细胞应该尽可能分散,大多数细胞处于单一状态。离心后,完全悬浮!有转移到六孔板上的,就是震动!摇晃时,不要让细胞液转向,否则细胞会全部被带到中间而不均匀!

  5、当一瓶细胞装满后,进行正常处理。 将它均匀地吹进培养瓶中,然后铺上6孔板,每孔2ml。 涂抹后,不用观察直接用酒精棉擦拭,然后放入培养箱中。 稍微向左三圈,向右三圈,先三圈,然后三圈。基本上,24小时后,每个孔中的细胞将非常均匀。

  6、计算所有所需的液体和细胞数量,混合均匀,并将其添加到六孔板中。 六孔板呈水平8字形波动。 在显微镜下观察。 如果不均匀,按照上述方法再次摇动。如果细胞没有计数并直接种植,在种植六孔板的过程中随时摇动混合瓶。 我通常顺时针或逆时针转动瓶子。

  7、先上下移动,然后在水平板上左右移动,每个方向移动5-6次,但关键是摇动后直接放入培养箱,不要做太多的运动,如照镜子,否则很容易在中间再次聚在一起。

新闻中心

联系我们

CONTACT US

手机:13966720705

电话:0571-85166756

邮箱:service@vtuobio.com

地址:浙江省杭州市西湖区紫荆花北路